Sekvenování ve velkém měřítku a de novo sekvenování

Sekvenování ve velkém měřítku se často zaměřuje na sekvenování velmi dlouhých DNA kusů, jak je ukázáno celými chromozomy, i přes rozsáhlé sekvenování lze podobně použít ke generování velmi velkého počtu krátkých sekvencí, jak je ukázáno v phage display. Pro delší cíle, jak ukazují chromozómy, společné přístupy sestávají z řezání (s omezujícími enzymy) nebo stříhání (s mechanickými silami) velkých DNA fragmentů na kratší DNA fragmenty. Fragmentovaný DNA pak může být klonován do DNA vektoru a amplifikován v bakteriálním hostiteli, jak ukazuje Escherichia coli. Krátký DNA fragmenty purifikované z jednotlivých bakteriálních kolonií jsou indikativně sekvenovány a elektronicky spojeny do jedné dlouhé souvislé zřetězení. Studie ukázaly, že přidání kroku výběru velikosti pro shromáždění DNA fragmentů jednotné velikosti může zlepšit účinnost sekvenování a přesnost sestavení genomu. V těchto studiích se ukázalo, že automatizované klížení je reprodukovatelnější a přesnější než ruční klížení.

Obrázek 149A | Příklad výsledků automatizovaného sekvenčního zakončení řetězce DNA. | Abizar na anglické Wikipedii / CC BY-SA (http://creativecommons.org/licenses/by-sa/3.0/legalcode) | Page URL : (https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Radioactive_Fluorescent_Seq.jpg) z Wikimedia Commons

Obrázek 149A | Příklad výsledků automatizovaného sekvenčního zakončení řetězce DNA. | Abizar na anglické Wikipedii / CC BY-SA (http://creativecommons.org/licenses/by-sa/3.0/legalcode) | Page URL : (https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Radioactive_Fluorescent_Seq.jpg) z Wikimedia Commons

Autor : Milos Pawlowski

Reference:

Techniky molekulární biologie I

Nástroje molekulární biologie II

Komentáře