Experimentální přístupy ke stanovení složení nukleových kyselin, například RNA a DNA, lze obvykle klasifikovat do biofyzikálních a biochemických metod. Biofyzikální metody používají základní fyzikální vlastnosti molekul pro stanovení složení, včetně rentgenové krystalografie NMR a kryo-EM. Biochemické metody využívají chemické vlastnosti nukleových kyselin pomocí specifických činidel a podmínek pro stanovení složení nukleových kyselin. Takové metody mohou zahrnovat chemické zkoušení se specifickými činidly nebo se mohou spoléhat na nativní nebo analogickou chemii. Odlišné experimentální přístupy mají jedinečné výhody a jsou vhodné pro odlišné experimentální účely.
Biofyzikální metody
Rentgenová krystalografie
Rentgenová krystalografie není běžná pouze pro nukleové kyseliny, protože ani DNA, ani RNA snadno nevytvářejí krystaly. Důvodem je vyšší stupeň vnitřní nemoci a dynamiky ve strukturách nukleových kyselin a negativně nabité (deoxy) ribosofosfátové hlavní řetězce, které se navzájem odpuzují v těsné blízkosti. Krystalizované nukleové kyseliny mají tendenci být komplexovány s proteinem, který je předmětem zájmu, aby poskytovaly strukturální regulaci a neutralizovaly negativní náboj.
Obrázek 225A | Nastavení kapilárního blotting systému pro přenos RNA z electrophoresis gelu na blotting membránu. | RNA405 / Public domain | Page URL : (https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Capillary_blot_setup.svg) from Wikimedia Commons
Autor : Milos Pawlowski
Komentáře
Okomentovat