Jednou z nejzákladnějších technik molekulární biologie pro studium proteinové služby je molekulární klonování. V této technice je DNA kódující požadovaný protein klonován pomocí polymerázové řetězové reakce( PCR) a / nebo restrikčních enzymů do plazmidu (expresní vektor). Vektor má 3 charakteristické rysy: počátek replikace, vícenásobné klonovací místo( MCS) a selektivní marker obvykle odolnost vůči antibiotikům. Upstream od vícenásobného klonovacího místa jsou promotorové oblasti a kopírovací počáteční místo, které reguluje formu exprese klonovaného genu. Tento plazmid může být vložen do bakteriálních nebo živočišných buněk. Zavádění DNA do bakteriálních buněk může být provedeno transformací pomocí vychytávání nahých DNA, conjugation prostřednictvím kontaktu buňka-buňka nebo transdukcí pomocí virového vektoru. Zavedení DNA do eukaryotických buněk, jak ukazují živočišné buňky, fyzikálními nebo chemickými prostředky se nazývá transfection. K dispozici je několik stejných technik transfection, jak ukazuje fosforečnan vápenatý transfection, elektroporace, mikroinjekce a lipozom transfection. Plazmid může být integrován do genomu, což má za následek stabilní transfection, nebo může zůstat nezávislý na genomu, nazývaný přechodný transfection .
Obrázek 095A | Schematický vztah mezi biochemií, genetikou a molekulární biologií Nebyl poskytnut žádný strojově čitelný autor. OldakQuill převzato (na základě nároků na autorská práva). (https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Schematic_relationship_between_biochemistry,_genetics_and_molecular_biology.svg), "Schematický vztah mezi biochemií, genetikou a molekulární biologií", https://creativecommons.org/licenses/by-sa/3.0/ legalcode od Wikimedia Commons
Autor : John Kaisermann
Komentáře
Okomentovat